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更新時間：2015-05-10 
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流(liú)式細(xì)胞術的發(fā)展(zhǎn)
流式細(xì)胞術zui初(chū)是開發(fā)應(yīng)用於(yú)醫(yī)學領域(yù)的，但是隨(suí)後逐(zhú)漸(jiàn)演變成了(liǎo)細胞(bāo)計(jì)數(shù)，分(fēn)類以(yǐ)及生物標記(jì)探測(cè)等(děng)不同領域內的(dí)有(yǒu)利工具(jù)[7]。盡管相(xiāng)關的*篇(piān)采用流(liú)式細(xì)胞(bāo)術(shù)進(jìn)行植物細(xì)胞核(hé)分析的文章發表於1973年[8]，但是(shì)采(cǎi)用流(liú)式(shì)細(xì)胞術所開(kāi)展的植物DNA分(fēn)析(xī)在(zài)上世(shì)紀(jì)80年代(dài)末才(cái)獲(huò)得了突(tū)飛猛進(jìn)的發展，從此所有(yǒu)研究人(rén)員(yuán)都開(kāi)始(shǐ)堅定(dìng)地(dì)在(zài)植(zhí)物研究(jiū)領域使用該(gāi)項技術。基本(běn)上，植(zhí)物(wù)學家(jiā)都是(shì)使用流式(shì)細胞術(shù)來測定(dìng)植物(wù)細胞核中(zhōng)的DNA含(hán)量(liáng)。有(yǒu)關流(liú)式細胞(bāo)術(shù)詳細(xì)的(dí)原理(lǐ)及應用的描(miáo)述，請參閱參(cān)考文(wén)獻(xiàn)9。
圖(tú)2a概(gài)括(kuò)表示了流式(shì)細(xì)胞儀(yí)如(rú)何通過電子(zǐ)檢測設備用一(yī)束(shù)水動力集中(zhōng)的液(yè)體(tǐ)流(liú)對經(jīng)染色的(dí)或(huò)靶(bǎ)向的粒子（尺寸介(jiè)於0.2μm-150μm[7]）進(jìn)行懸浮排(pái)列(liè)。在植物(wù)研(yán)究中，先(xiān)用(yòng)熒(yíng)光(guāng)標記物（比(bǐ)如(rú)：DAPI[4’,6-二脒基(jī)-2-苯基(jī)吲哚]或(huò)碘(diǎn)化丙啶(dìng)）對(duì)細胞核(hé)（比(bǐ)如：粒子）進行(háng)染色。然(rán)後(hòu)，每一(yī)個(gè)懸(xuán)浮的(dí)細胞核暴露(lòu)於(yú)光束(shù)（通(tōng)常為激光(guāng)或UV燈光）之(zhī)中，於是(shì)光(guāng)的路(lù)徑(jìng)被分散並(bìng)由檢(jiǎn)測(cè)器(qì)感(gǎn)知(zhī)，用(yòng)於分析(xī)每一個單獨粒(lì)子的(dí)熒光強度，為(wéi)核酸(suān)中DNA含(hán)量的測(cè)定提供信(xìn)息。成千上萬個(gè)完整(zhěng)細(xì)胞核的合並數(shù)據(jù)可為單獨組織的(dí)DNA含(hán)量(liáng)提供信息(xī)（參(cān)見圖1中的(dí)波(bō)峰(fēng)）。由於每(měi)一秒鐘(zhōng)幾(jī)乎會(huì)同時進(jìn)行分析多(duō)達(dá)數千個(gè)粒子的物理(lǐ)和/或(huò)化(huà)學(xué)特(tè)征，因此(cǐ)用於樣品(pǐn)分(fēn)離(lí)和樣(yàng)品檢測的溶液(yè)的(dí)質(zhì)量(liáng)和純度非常關鍵(jiàn)。
如果使用的(dí)是(shì)低(dī)品(pǐn)質(zhì)或(huò)不(bù)合適的水(shuǐ)供應(yīng)係統，則出(chū)現的(dí)不屬於樣品的(dí)汙染物(wù)顆粒會發(fā)生(shēng)熒光反(fǎn)應並產(chǎn)生“噪(zào)聲(shēng)"，這會幹(gān)擾檢測結(jié)果(guǒ)並(bìng)導致zui終(zhōng)錯誤的評估。因此(cǐ)，實(shí)驗時必(bì)須要使(shǐ)用高(gāo)品質(zhì)的(dí)超純(chún)水(shuǐ)。
超純(chún)水係統生(shēng)產的(dí)超純(chún)水(shuǐ)達到ASTM I級(jí)品(pǐn)質
能(néng)夠生產出達到(dào)ASTM I級(jí)品質超純水的(dí)超純(chún)水係(xì)統(tǒng)由(yóu)賽多利斯（哥廷根，德國）提供。使用(yòng)arium? pro VF水係統生(shēng)產的(dí)超純水（ArUPH2O）進行流(liú)式細胞分(fēn)析，為(wéi)了(liǎo)評估(gū)超純水對分(fēn)析(xī)結果的(dí)質量所(suǒ)產(chǎn)生的(dí)影響(xiǎng)，作者檢查(chá)了(liǎo)兼性(xìng)孤雌(cí)生殖(zhí)的被子(zǐ)植(zhí)物(wù)用於(yú)生(shēng)產(chǎn)種(zhǒng)子(zǐ)的(dí)繁殖途(tú)徑(jìng)。這(zhè)是通過(guò)比較分別采用ArUPH2O和標準鞘(qiào)液溶液（0.04%*， 0, 01%去(qù)汙(wū)劑）對樣品進(jìn)行檢測所(suǒ)獲得(dé)的結(jié)果而(ér)實現的(dí)（Partec GmbH）。
arium? pro VF係(xì)統(tǒng)（圖(tú)3）從(cóng)經(jīng)過(guò)預處理(lǐ)的(dí)飲用水中通(tōng)過去除所有汙染微粒而生(shēng)產出超純(chún)水(shuǐ)。超(chāo)純水(shuǐ)的生產需要持續循(xún)環(huán)和一(yī)個(gè)恒定的水流速(sù)率，這(zhè)可以通過一個帶壓力控製功(gōng)能(néng)的泵(bèng)係統來實現(xiàn)。在進水端口和(hé)下遊端(duān)口(kǒu)，或者產水(shuǐ)端口(kǒu)進(jìn)行電導率(shuài)的測定(dìng)。
本(běn)文(wén)所描(miáo)述的(dí)測試用arium? pro VF水(shuǐ)係統（老(lǎo)一代與(yǔ)當(dāng)前(qián)的新(xīn)一代arium? pro VF水係統有著*相(xiāng)同(tóng)的技術設(shè)計，如圖(tú)3所示）通過(guò)兩支不同的濾(lǜ)芯(xīn)來工作。這兩(liǎng)支(zhī)濾芯裝填有特殊的活性炭(tàn)吸(xī)附(fù)劑和混床(chuáng)離子(zǐ)交換(huàn)樹脂(zhī)，用(yòng)以生產(chǎn)總有(yǒu)機活性(xìng)炭（TOC）含(hán)量極(jí)低(dī)的(dí)超純水。此(cǐ)外，係統還(huán)有一(yī)個集成的UV燈，在波長為185nm和(hé)254nm時(shí)分別(bié)具有(yǒu)氧化有機物(wù)和殺菌效果。
除(chú)此(cǐ)之外，arium? pro VF超純水係(xì)統有一(yī)個內(nèi)置(zhì)的(dí)作為切向流(liú)過濾器(qì)使用的(dí)超濾(lǜ)模(mó)塊。該過濾器中整合的超濾(lǜ)膜可(kě)截(jié)留膠體，微(wēi)生(shēng)物(wù)，內毒素，RNA以(yǐ)及(jí)DNA等。出水端口(kǒu)安(ān)裝有一個0.2μm的終(zhōng)端(duān)過濾(lǜ)器，用以去除超(chāo)純(chún)水生(shēng)產後(hòu)分配過程中(zhōng)的(dí)微粒(lì)和細菌。該設(shè)備(bèi)生(shēng)產純(chún)水(shuǐ)的工(gōng)藝流程請(qǐng)參閱圖(tú)4。
材料(liào)與方法(fǎ)
種子樣品(pǐn)來源(yuán)於(yú)六倍體毛茛(gèn)屬(shǔ)植物(wù)，在(zài)自由(yóu)授(shòu)粉的條件下(xià)進行挑選(xuǎn)收(shōu)集。種子個(gè)體(tǐ)在塑(sù)料(liào)有蓋(gài)培養皿(mǐn)內用(yòng)300μl的(dí)提取緩衝液(yè)（CyStain UV Precise P, Partec GmbH）進行碾碎，然後在室(shì)溫下孵育10分鐘，再將細(xì)胞核過(guò)濾（30μl漿狀(zhuàng)物，CellTric?, Partec GmbH）至一個5-mL的(dí)塑料管中(zhōng)。而後，加入1.2mL染色緩衝(chōng)液（CyStain UV Precise P），60秒(miǎo)後，樣(yàng)品進(jìn)入流式細胞儀(yí)（CyFlow Space，Partec GmbH；參(cān)見(jiàn)圖2b）的藍(lán)色熒(yíng)光(guāng)通道進(jìn)行(háng)分析。更多內(nèi)容 ?
結果
總共有61個單(dān)獨種(zhǒng)子重建(jiàn)了(liǎo)繁(fán)殖途徑(jìng)。根(gēn)據(jù)建(jiàn)議的標(biāo)準(zhǔn)程(chéng)序，30個種子使用(yòng)鞘(qiào)液懸浮，31個種子(zǐ)使用ArUPH2O（電導率： 0.055μs/cm或18.2MΩ×cm電阻補償(cháng)至(zhì)25℃）懸浮(fú)。平(píng)均每個樣品測試了2329個細(xì)胞(bāo)核，占總計數粒(lì)子的(dí)73%，而其它(tā)27%表現(xiàn)為細胞(bāo)周期(qī)G2階段的(dí)細(xì)胞(bāo)核(hé)或者(zhě)背(bèi)景信(xìn)號(hào)。針對所(suǒ)有(yǒu)被分析(xī)的種子(zǐ)，全部(bù)要根(gēn)據每個(gè)峰所(suǒ)富集的(dí)平(píng)均總(zǒng)數來計(jì)算胚胎和胚乳(rǔ)的(dí)平(píng)均(jūn)峰(fēng)位置。更多內容 ?
討論(lùn)
總(zǒng)之(zhī)，所(suǒ)獲(huò)得的(dí)測(cè)試結果中具有極小的差異(yì)，這(zhè)證實(shí)了arium係統是適用於(yú)植(zhí)物材(cái)料(liào)相對(duì)倍(bèi)性分(fēn)析的快(kuài)速又經(jīng)濟的選擇(zé)。高品(pǐn)質的(dí)arium超純水水被證明(míng)用(yòng)於實(shí)現流失細胞種子(zǐ)篩選(xuǎn)技(jì)術(shù)上的(dí)可(kě)重現(xiàn)結果是(shì)非常(cháng)有(yǒu)效的。盡(jìn)管(guǎn)如此，由於(yú)抗生素和去(qù)汙(wū)劑(jì)之(zhī)類的(dí)添(tiān)加劑具有(yǒu)可(kě)阻止(zhǐ)生(shēng)物膜(mó)的形成，以(yǐ)及(jí)增(zēng)加(jiā)容(róng)器，管道(dào)，閥(fá)門以(yǐ)及(jí)流動(dòng)腔(qiāng)內表麵(miàn)的(dí)濕(shī)度(dù)等作(zuò)用(yòng)，對流失細(xì)胞(bāo)係(xì)統(tǒng)的可靠操(cāo)作會造成(chéng)長(cháng)期或短期(qī)的(dí)正麵(miàn)影(yǐng)響，因此(cǐ)供(gōng)應商一(yī)般(bān)會建議(yì)在自製的鞘液中(zhōng)添加(jiā)此(cǐ)類物質(zhì)。
簡(jiǎn)而(ér)言之(zhī)，ArUPH2O可即時(shí)用於植(zhí)物(wù)細胞的(dí)流式(shì)細(xì)胞技術(shù)。由於(yú)流失細胞技術在其它(tā)應用中越(yuè)來(lái)越重要，比(bǐ)如腫(zhǒng)瘤(liú)細胞的檢測，細胞的定量測定與形態(tài)分(fēn)化，細(xì)胞(bāo)周期分析，DNA-RNA含量估(gū)算，以及(jí)凋亡檢(jiǎn)測等(děng)等，ArUPH2O的(dí)全麵適(shì)用性為(wéi)arium超(chāo)純(chún)水在一係(xì)列(liè)使用流(liú)式細胞(bāo)術(shù)的(dí)新興技術中的應(yīng)用(yòng)創造了新機(jī)會。
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