細胞(bāo)培(péi)養實(shí)驗

更新(xīn)時間：2021-12-15

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細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)（cell culture）是(shì)指在(zài)體外模(mó)擬(nǐ)體內環境（無菌(jūn)，適宜(yí)溫度(dù)，酸(suān)鹼度(dù)和(hé)一(yī)定(dìng)營養(yǎng)條件(jiàn)等），使(shǐ)之(zhī)生存，生長(cháng)，繁殖並維持(chí)主要結(jié)構和功能的一(yī)種方(fāng)法。細胞(bāo)培養也叫(jiào)細胞克隆技術(shù)，在生物(wù)學(xué)中(zhōng)的(dí)正規名詞為細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)技術(shù)。不論對於(yú)整個生(shēng)物(wù)工(gōng)程技術(shù)，還是其(qí)中(zhōng)之一(yī)的(dí)生物克(kè)隆(lóng)技術來(lái)說，細(xì)胞(bāo)培(péi)養都是一(yī)個(gè)關鍵(jiàn)的過程，細胞(bāo)培養本身(shēn)就是細胞的大(dà)規模(mó)克(kè)隆(lóng)。細胞培(péi)養技術可以(yǐ)由一個(gè)細(xì)胞經過(guò)大(dà)量(liáng)培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極(jí)少分(fēn)化的多細胞，這是克隆(lóng)技(jì)術必要的環節(jié)，而且細胞(bāo)培養本(běn)身(shēn)就(jiù)是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)是(shì)細胞(bāo)生物學研(yán)究方法中重(zhòng)要(yào)和(hé)常(cháng)用技術，通過細(xì)胞培養既可以(yǐ)獲得大量細(xì)胞，又(yòu)可(kě)以借此研(yán)究細胞(bāo)的(dí)信號(hào)轉導，細胞(bāo)的合成代謝，細胞(bāo)的生長增(zēng)殖(zhí)等。

細(xì)胞(bāo)培養實驗室(shì)組建(jiàn)的(dí)基(jī)本要(yào)求(qiú):

1，細(xì)胞培養(yǎng)是一(yī)種(zhǒng)無菌操作(zuò)技術，要求工(gōng)作環(huán)境(jìng)和條件(jiàn)必(bì)須保證無微生物汙染(rǎn)和不受(shòu)其它有(yǒu)害因(yīn)素的影響。

2，細胞培養(yǎng)室和設計(jì)原則(zé)是防(fáng)止微生(shēng)物汙染和(hé)有(yǒu)害因素影(yǐng)響(xiǎng)，要(yào)求工(gōng)作環(huán)境清潔(jié)，空氣(qì)清新(xīn)，幹(gān)燥和(hé)無煙(yān)塵。

3，細胞(bāo)培(péi)養室的(dí)設計原(yuán)則(zé)一般(bān)是無菌(jūn)操作區設在室內較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常(cháng)規操作和封閉(bì)培(péi)養於一(yī)室，為10萬級(jí)潔淨環境(jìng)的潔(jié)淨(jìng)室(shì)。而洗(xǐ)刷(shuā)消毒(dú)工(gōng)作設在潔(jié)淨室外，避(bì)免物品(pǐn)汙染潔淨室(shì)內環境。細(xì)胞潔淨(jìng)室需(xū)要一個空(kōng)調(tiáo)係統並對(duì)外(wài)界保(bǎo)持一定的正壓(yā)。

4，解(jiě)剖實驗(yàn)室(shì)主要用於對(duì)器(qì)官(guān)組(zǔ)織(zhī)的分(fēn)離(lí)，需要有(yǒu)無(wú)菌(jūn)操(cāo)作(zuò)台，解剖(pōu)顯微鏡，各(gè)種(zhǒng)手術器材(cái)等組(zǔ)織細胞(bāo)培(péi)養室(shì)除一(yī)般實(shí)驗室的普通常規(guī)設(shè)備(bèi)外(wài)，尚有一些特(tè)殊需(xū)要的設備。基本可分為(wéi)兩(liǎng)大類：

I. 細胞培養實驗(yàn)室(shì)常用的(dí)基(jī)本(běn)儀器設(shè)備

1.顯微鏡：倒置顯微鏡——是組(zǔ)織(zhī)細(xì)胞培養室所必需(xū)的(dí)日(rì)常工(gōng)作常規(guī)使用設備之一，便於掌(zhǎng)握(wò)細(xì)胞(bāo)的生長情況(kuàng)並(bìng)觀察(chá)有無汙(wū)染等。

2.培養箱(xiāng)：體外(wài)培(péi)養的細(xì)胞(bāo)和(hé)體(tǐ)內細胞一樣，需(xū)要在(zài)恒定的溫度(dù)下(xià)生(shēng)存(cún)，大(dà)多(duō)數情(qíng)況(kuàng)下(xià)，最適溫度(dù)是37℃，溫(wēn)差變(biàn)化一般不應超(chāo)過(guò)±0.5℃，細胞在(zài)溫度(dù)升高2℃ 時，持(chí)續數小時(shí)即不能耐(nài)受，40℃以上將很快死亡(wáng)。因(yīn)此(cǐ)需要有能(néng)控製溫度的培(péi)養(yǎng)箱(xiāng)，如(rú)具(jù)有(yǒu)較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及(jí)CO2培(péi)養(yǎng)箱。

3.幹燥(zào)箱：用(yòng)於細(xì)胞培養(yǎng)箱(xiāng)的有(yǒu)些(xiē)器械，器(qì)皿(mǐn)需要烘幹後才(cái)能使(shǐ)用，玻璃器(qì)皿(mǐn)等(děng)須幹熱(rè)消(xiāo)毒。

4.水(shuǐ)純化裝置：細胞(bāo)培養對水的質(zhì)量要求較(jiào)高，細(xì)胞(bāo)培(péi)養(yǎng)以(yǐ)及與(yǔ)細(xì)胞(bāo)培(péi)養工(gōng)作(zuò)相關(guān)的液體的配製用(yòng)水必(bì)須事先嚴格純(chún)化處(chǔ)理(lǐ)。進(jìn)行(háng)細胞(bāo)培(péi)養時(shí)配(pèi)製(zhì)各(gè)種(zhǒng)培養液及試(shì)劑(jì)等(děng)均需使用(yòng)三(sān)次(cì)蒸(zhēng)餾水：即(jí)使是用於玻璃器皿的衝(chōng)洗(xǐ)，也應使(shǐ)用二(èr)次以上(shàng)蒸餾水(shuǐ)。

5.冰(bīng)箱：細胞(bāo)培(péi)養室必須配備。
a，普通冰箱或冷藏(cáng)櫃——儲存培養液(yè)，生理鹽(yán)水等培(péi)養(yǎng)用(yòng)的物品(pǐn)及短期保(bǎo)存組(zǔ)織標本(běn)。
b，低溫冰(bīng)箱（-20℃）——用於儲存需(xū)要冷凍保存(cún)生(shēng)物活性及(jí)較(jiào)長時(shí)期存放(fàng)的製劑(jì)，如酶，血(xiě)清等(děng)。

6.細胞(bāo)冷(lěng)凍儲存(cún)器：儲存器常(cháng)用的(dí)是液(yè)氮容器。根(gēn)據(jù)使(shǐ)用需要(yào)分(fēn)為不同的類型及多種(zhǒng)規(guī)格。選(xuǎn)擇購置液氮容器時要綜(zōng)合考慮(lǜ)容積大(dà)小(xiǎo)，取放(fàng)使(shǐ)用方便(biàn)及液氮(dàn)揮發量(liáng)（經濟(jì)）三種因(yīn)素。

7.離(lí)心機：進(jìn)行細胞(bāo)培(péi)養(yǎng)時(shí)，常(cháng)規需要進(jìn)行製(zhì)備(bèi)細胞懸液，調整(zhěng)細(xì)胞密度，洗(xǐ)滌(dí)，收(shōu)集細胞等(děng)工(gōng)作，通(tōng)常(cháng)需要(yào)使用實驗室(shì)離(lí)心機(jī)。一般可(kě)常(cháng)規配置(zhì)4000rpm的(dí)台(tái)式(shì)離心機(jī)，例如細(xì)胞(bāo)沉(chén)降(jiàng)，使用低速(sù)離心(xīn)機即(jí)可(kě)，離心力過大有時可能(néng)引起(qǐ)細胞的損傷(shāng)。

8.天平：常用(yòng)的有(yǒu)扭(niǔ)力(lì)天平(píng)，精(jīng)密天(tiān)平及各種電子天(tiān)平。

9.消毒器：一(yī)般(bān)為(wéi)高壓蒸汽(qì)滅菌(jūn)鍋(guō)，直接(jiē)或間接與細胞接(jiē)觸(chù)的(dí)物品均(jūn)需消毒滅(miè)菌處(chǔ)理。

10.濾器(qì)：目前(qián)細(xì)胞培(péi)養(yǎng)工(gōng)作(zuò)中采(cǎi)用的培養用(yòng)液，包(bāo)括人工合成培養液，血清(qīng)，消(xiāo)化用胰酶等常(cháng)含(hán)有(yǒu)維(wéi)生(shēng)素，蛋(dàn)白(bái)，多肽(tài)，生(shēng)長因子等(děng)物質，這些(xiē)物(wù)質在(zài)高溫或射(shè)綫照射(shè)下易(yì)發生變性或(huò)失去功能(néng)，因而上(shàng)述(shù)液體(tǐ)多采(cǎi)用濾過(guò)消毒以除(chú)去細菌(jūn)。目前(qián)常(cháng)使(shǐ)用(yòng)的濾器(qì)有(yǒu)玻(bō)璃濾器和微孔(kǒng)濾器，各(gè)種濾(lǜ)器(qì)有其使用原理和特點。

培養用(yòng)器(qì)皿(mǐn)是(shì)供(gōng)細胞接種，生長等(děng)用的器(qì)皿，可(kě)由透明度(dù)好，無毒(dú)的中性硬質玻(bō)璃或無毒而(ér)透明(míng)光滑(huá)的(dí)特(tè)製(zhì)塑料製(zhì)成。細(xì)胞(bāo)培養(yǎng)中需(xū)要的各(gè)種耗(hào)材(cái),各類細(xì)胞(bāo)培養板，細胞(bāo)培養瓶，平(píng)皿移液管(guǎn)等(děng)。

培(péi)養瓶：由玻(bō)璃或(huò)塑(sù)料製(zhì)成。主要(yào)用於培養，繁殖細(xì)胞。進(jìn)行(háng)培(péi)養時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口(kǒu)加蓋(gài)螺旋瓶(píng)蓋(gài)或膠(jiāo)塞，膠塞(sāi)多(duō)用(yòng)於密(mì)封(fēng)培(péi)養。

培(péi)養皿(mǐn)：由玻(bō)璃(lí)或塑(sù)料製成，供(gōng)盛取(qǔ)，分(fēn)離，處理組織或做(zuò)細胞(bāo)毒(dú)性，集(jí)落(là)形成，單(dān)細胞(bāo)分(fēn)離，同位(wèi)素(sù)摻入，細胞繁殖(zhí)等(děng)實驗使用(yòng)。常(cháng)用的培養皿(mǐn)規(guī)格(gé)有(yǒu) 10cm，9cm，6cm，3.5cm等(děng)。

多(duō)孔(kǒng)培養板(bǎn)：為塑料製品(pǐn)。可(kě)供細(xì)胞克隆及(jí)細胞(bāo)毒(dú)性等(děng)各種(zhǒng)檢(jiǎn)測實驗使(shǐ)用(yòng)。其(qí)優點是節(jié)約(yuē)樣(yàng)本及(jí)試劑(jì)，可(kě)同時測試(shì)大量(liáng)樣本，易(yì)於進行無菌操(cāo)作(zuò)。培(péi)養(yǎng)板分(fēn)為(wéi)各種規格(gé)，常(cháng)用的(dí)規格有(yǒu)：96孔，24孔，12孔，6孔，4孔等。

II，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗室(shì)特(tè)殊設備

細胞(bāo)培(péi)養實(shí)驗室除了應(yīng)配備上述的常用基本設備以外，如(rú)有條件(jiàn)，可(kě)添置一(yī)些(xiē)特(tè)殊或(huò)先進的設備(bèi)儀器，以(yǐ)便(biàn)更(gēng)有(yǒu)效(xiào)，更精(jīng)確，更(gēng)深入地(dì)進行(háng)實驗室工(gōng)作(zuò)。例如：
（1）酶(méi)聯(lián)免(miǎn)疫檢(jiǎn)測(cè)儀——可用於進行免疫(yì)學測定(dìng)及細(xì)胞(bāo)毒(dú)性，藥物敏感性檢測等。
（2）超低溫冰箱（-80℃）——便於儲存(cún)某些試劑及標(biāo)本。
（3）旋(xuán)轉培養器——用於(yú)某(mǒu)些特(tè)殊(shū)細胞或(huò)需(xū)要(yào)收(shōu)獲大量細胞的(dí)培養(yǎng)。
（4）熒(yíng)光(guāng)顯(xiǎn)微鏡(jìng)——進(jìn)行(háng)熒光(guāng)染(rǎn)色(sè)樣本(běn)的觀(guān)察(chá)。
（5）流式(shì)細(xì)胞(bāo)儀(yí)——可(kě)更(gēng)精確及快速(sù)檢(jiǎn)測細胞(bāo)。
（6）用於檢測細(xì)胞培養條件的各(gè)種儀器，例如(rú)專(zhuān)門為(wéi)快(kuài)速(sù)分析細胞(bāo)培養(yǎng)基中主(zhǔ)要(yào)或關(guān)鍵營養(yǎng)成分，代(dài)謝產物及(jí)氣(qì)體(tǐ)含(hán)量設計(jì)的(dí)多(duō)功(gōng)能(néng)細胞(bāo)培養分析(xī)儀，手(shǒu)提式CO2濃(nóng)度(dù)測定儀(yí)等。

很(hěn)多人會(huì)詢問(wèn)，細胞(bāo)培養(yǎng)獲得(dé)成功(gōng)的關(guān)鍵要素(sù)是什麼(mó)? 小編的(dí)經驗就是(shì)：

1.了解所(suǒ)培養(yǎng)細(xì)胞的生長周期(qī)；
2 細(xì)心(xīn)+實(shí)驗條(tiáo)件允(yǔn)許(xǔ)
3 培養(yǎng)細(xì)胞(bāo)需要(yào)有(yǒu)備份(fèn)的條(tiáo)件(jiàn)下(xià)去(qù)嘗試(shì)新的(dí)培(péi)養(yǎng)方(fāng)式，否(fǒu)則實(shí)驗(yàn)失敗了(liǎo)導(dǎo)致(zhì)細(xì)胞株(zhū)也(yě)沒(méi)了。實(shí)驗記錄詳細完整(zhěng)也是很(hěn)關鍵的
4.選擇(zé)合適的(dí)實(shí)驗室(shì)儀(yí)器(qì)。

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