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液相色(sè)譜(pǔ)峰(fēng)拖(tuō)尾(wěi)原因(yīn) HPLC常見問(wèn)題及(jí)對(duì)策

更(gēng)新時間：2016-09-20

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A，峰(fēng)拖尾
1，篩板(bǎn)阻塞（a，反(fǎn)衝色譜柱(zhù) b，更換(huàn)進口篩(shāi)板(bǎn) c，更換色譜(pǔ)柱(zhù)）
2，色譜柱(zhù)塌陷（填充色(sè)譜柱(zhù)）
3，幹(gān)擾峰(fēng)（a，使用(yòng)更長的色譜(pǔ)柱(zhù) b，改(gǎi)變流動相(xiāng)或(huò)更(gēng)換(huàn)色譜柱）
4，流(liú)動相PH選擇(zé)錯誤（調整PH值。對於(yú)鹼性化(huà)合物，低PH值更(gēng)有(yǒu)利(lì)於得(dé)到(dào)對稱峰）
5，樣品與填料(liào)表麵的溶(róng)化點發(fā)生(shēng)反(fǎn)應（a，加入離子對試劑(jì)或鹼(jiǎn)性(xìng)揮發性(xìng)修(xiū)飾劑(jì)b，換柱子）
B，峰(fēng)前(qián)延
1，柱(zhù)溫(wēn)低(dī)（升高柱溫）          2，樣品溶(róng)劑(jì)選擇不恰(qià)當（使用流動(dòng)相作為(wéi)樣品(pǐn)溶劑）
3，樣品(pǐn)過(guò)載（降(jiàng)低樣(yàng)品含(hán)量） 4，色譜柱(zhù)損壞（見(jiàn)A1，A2）
C，峰分(fēn)叉
1，保(bǎo)護柱或分(fēn)析(xī)柱(zhù)汙(wū)染(rǎn)圖（取(qǔ)下保護柱再進行分析。如果必要更換(huàn)保護柱。如(rú)果分析柱(zhù)阻(zǔ)塞(sāi)，拆(chāi)下來清洗(xǐ)。如(rú)果問題仍然存(cún)在，可(kě)能是(shì)柱子(zǐ)被(bèi)強保(bǎo)留(liú)物質(zhì)汙(wū)染(rǎn)，運用適(shì)當(dāng)的(dí)再生措(cuò)施(shī)。如果(guǒ)問(wèn)題(tí)仍(réng)然存(cún)在(zài)，入口(kǒu)可能被(bèi)阻(zǔ)塞(sāi)，更換篩板或(huò)更換(huàn)色(sè)譜(pǔ)柱。）
2，樣品(pǐn)溶(róng)劑(jì)不溶於流動相（改變樣(yàng)品溶劑。如(rú)果(guǒ)可能采取流動相(xiāng)作(zuò)為(wéi)樣品(pǐn)溶劑(jì)。）
D，峰(fēng)變(biàn)形(xíng)
1，樣(yàng)品過載(zǎi) （減(jiǎn)少樣(yàng)品(pǐn)載量）
E，早(zǎo)出的(dí)峰(fēng)變(biàn)形(xíng)
1，樣品溶劑選擇(zé)不(bù)恰當(dāng) （a，減(jiǎn)少(shǎo)進樣體(tǐ)積 b，運用低(dī)極(jí)性樣品(pǐn)溶劑）
F，早(zǎo)出的峰(fēng)拖(tuō)尾(wěi)程(chéng)度(dù)大於晚(wǎn)出(chū)的(dí)峰
1，柱(zhù)外效(xiào)應（a，調(tiáo)整係統連接（使用(yòng)更短，內(nèi)徑更(gēng)小(xiǎo)的管(guǎn)路） b，使用小(xiǎo)體積(jī)的(dí)流通池）
G， K’增(zēng)加時，脫(tuō)尾更(gēng)嚴重
1，二(èr)級保(bǎo)留效應(yīng)，反(fǎn)相(xiāng)模式（a，加入三乙(yǐ)胺(àn)（或鹼性樣(yàng)品）b，加(jiā)入(rù)乙(yǐ)酸（或酸(suān)性(xìng)樣品）c，加入(rù)鹽或(huò)緩(huǎn)衝(chōng)劑(jì)（或(huò)離子化樣品）d，更換一支柱子）
2，二級(jí)保留效應(yīng)，正(zhèng)相模(mó)式（a，加入(rù)三(sān)乙胺（或鹼(jiǎn)性樣(yàng)品）b，加(jiā)入(rù)乙酸(suān)（或酸(suān)性樣品）c，加(jiā)入(rù)水（或(huò)多官(guān)能團化(huà)合物(wù)）d，試用另一(yī)種方(fāng)法(fǎ)）
3，二級(jí)保留效應，離子對 (加入三乙(yǐ)胺(àn)（或鹼性(xìng)樣品）)
H，酸性或鹼(jiǎn)性(xìng)化合(hé)物的峰拖(tuō)尾(wěi)
1，緩(huǎn)衝不(bù)合(hé)適(shì) (a，使(shǐ)用(yòng)濃度50-100mM的緩(huǎn)衝液 b，使用(yòng)Pka等(děng)於流動相PH值(zhí)的緩衝(chōng)液(yè))
I，額(é)外(wài)的(dí)峰
1，樣品中有其他(tā)組份 (正(zhèng)常(cháng))
2，前(qián)一(yī)次(cì)進(jìn)樣的洗脫峰 (a，增加運行(háng)時間或(huò)梯(tī)度斜率(shuài) b，提(tí)高(gāo)流速(sù))
3，空位或鬼峰(fēng) (a，檢(jiǎn)查流(liú)動相(xiāng)是否(fǒu)純(chún)淨(jìng) b，使用流動相作(zuò)為(wéi)樣品溶劑(jì) c，減少進樣(yàng)體積)
J，保留(liú)時間波動(dòng)
1，溫(wēn)控不(bù)當 (調好(hǎo)柱(zhù)溫)    2，流(liú)動相(xiāng)組(zǔ)分變(biàn)化(huà) (防止(zhǐ)變(biàn)化（蒸(zhēng)發，反應(yīng)等）)
3，色譜(pǔ)柱沒有(yǒu)平衡 (在每(měi)一次運(yùn)行之(zhī)前(qián)給予(yú)足夠的時間平(píng)衡(héng)色譜柱)
K，保(bǎo)留(liú)時間(jiān)不斷變(biàn)化(huà)
1，流(liú)速(sù)變(biàn)化 (重新設定流(liú)速(sù))    2，泵中(zhōng)有(yǒu)氣泡(pào) (從泵(bèng)中(zhōng)除(chú)去氣(qì)泡)
3，流動相選擇不恰當 (a，更(gēng)換(huàn)合適的流動相 b，選(xuǎn)擇(zé)合(hé)適的(dí)混(hùn)合流動相(xiāng))
L，基(jī)綫漂(piāo)移
1，柱(zhù)溫(wēn)波(bō)動(dòng),即使(shǐ)是很(hěn)小(xiǎo)的(dí)溫度(dù)變化都(dū)會引起基綫的波(bō)動(dòng)。通常影(yǐng)響示(shì)差(chà)檢(jiǎn)測器，電導檢測器(qì)，較低靈(líng)敏度(dù)的紫(zǐ)外檢測(cè)器或(huò)其(qí)它光電類(lèi)檢測(cè)器。 (控製好(hǎo)柱(zhù)子(zǐ)和(hé)流動相(xiāng)的溫度，在檢測(cè)器(qì)之前使用熱(rè)交(jiāo)換器圖)
2，流動相不均匀,流(liú)動(dòng)相(xiāng)條件(jiàn)變化引起的基(jī)綫(xiàn)漂移大於溫(wēn)度導(dǎo)致的(dí)漂(piāo)移(yí)。(使(shǐ)用(yòng)HPLC級(jí)的(dí)溶劑，高純度的(dí)鹽(yán)和(hé)添加(jiā)劑。流動相(xiāng)在(zài)使用前(qián)進行脫(tuō)氣，使用中使(shǐ)用氦(hài)氣。)
3，流通(tōng)池(chí)被汙(wū)染(rǎn)或有氣(qì)體(tǐ) (用甲醇或其他(tā)強(qiáng)極性(xìng)溶劑衝洗(xǐ)流通(tōng)池。如有(yǒu)需要，可以(yǐ)用1M的(dí)硝(xiāo)酸。（不(bù)要(yào)用鹽(yán)酸）)
4，檢(jiǎn)測(cè)器出(chū)口阻(zǔ)塞(sāi),高壓(yā)造成(chéng)流通池(chí)窗口破裂，產生(shēng)噪(zào)音基(jī)綫 (取(qǔ)出阻塞物或更換管子。參(cān)考檢測(cè)器手(shǒu)冊(cè)更(gēng)換流通(tōng)池窗)
5，流動(dòng)相(xiāng)配比不(bù)當或(huò)流速(sù)變化 (更改配比或流(liú)速(sù),定期(qī)檢(jiǎn)查流(liú)動相(xiāng)組(zǔ)成(chéng)及(jí)流速(sù))
6，柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生(shēng)變化時 (用中等(děng)強度(dù)的溶劑(jì)進行(háng)衝洗，更改(gǎi)流動(dòng)相(xiāng)時(shí)，在分(fēn)析(xī)前用10-20倍(bèi)體(tǐ)積的新(xīn)流動(dòng)相對柱子(zǐ)進(jìn)行衝洗)
7，流動(dòng)相(xiāng)汙(wū)染，變質(zhì)或由(yóu)低(dī)品(pǐn)質溶劑配成（檢(jiǎn)查流(liú)動相的組(zǔ)成。使用(yòng)高品質(zhì)的化學試(shì)劑及(jí)HPLC級的溶劑）
8，樣品中(zhōng)有(yǒu)強(qiáng)保(bǎo)留的(dí)物質（高K’值）以饅頭(tóu)峰(fēng)樣被(bèi)洗脫出(chū)，從而表(biǎo)現(xiàn)出(chū)一個(gè)逐步升高(gāo)的(dí)基(jī)綫。（使用保護柱(zhù)，如有必要，在進樣(yàng)之間或在(zài)分(fēn)析過程中，定期(qī)用強(qiáng)溶劑衝(chōng)洗(xǐ)柱(zhù)子(zǐ)）
9，使用(yòng)循環溶劑，但檢(jiǎn)測(cè)器(qì)未(wèi)調(tiáo)整（重新(xīn)設定(dìng)基綫。當檢測(cè)器(qì)動力學範圍發生(shēng)變化時，使(shǐ)用新(xīn)的流動(dòng)相）
10，檢測器沒有(yǒu)設(shè)定(dìng)在zui大吸(xī)收(shōu)波(bō)長(cháng)處。（將(jiāng)波(bō)長調(tiáo)整至zui大吸收(shōu)波長(cháng)處(chǔ)）

采(cǎi)用反(fǎn)相色譜法分離弱酸(suān)（3≤pKa≤7）或弱鹼(jiǎn)（7≤pKa≤8）樣品時(shí)，通(tōng)過調節流動相的(dí)pH值，以抑(yì)製樣品組分(fēn)的解離，增(zēng)加(jiā)組(zǔ)分(fēn)在(zài)固(gù)定相(xiāng)上(shàng)的保留(liú)，並改(gǎi)善峰(fēng)形的技術(shù)稱(chēng)為反(fǎn)相(xiāng)離子抑製(zhì)技術。對(duì)於弱酸，流(liú)動(dòng)相(xiāng)的(dí)pH值越(yuè)小(xiǎo)，組分(fēn)的k值越大，當pH值遠遠(yuǎn)小(xiǎo)於(yú)弱酸(suān)的(dí)pKa值(zhí)時，弱酸(suān)主(zhǔ)要(yào)以分子(zǐ)形式存(cún)在(zài)；對(duì)弱鹼(jiǎn)，情況相(xiāng)反。分析弱酸(suān)樣品時，通常在(zài)流(liú)動相中(zhōng)加(jiā)入少量弱酸，常(cháng)用(yòng)50mmol/L磷酸鹽(yán)緩(huǎn)衝液和(hé)1%醋酸溶(róng)液；分(fēn)析(xī)弱(ruò)鹼樣品時(shí)，通常(cháng)在流(liú)動相(xiāng)中加入(rù)少(shǎo)量(liáng)弱鹼(jiǎn)，常(cháng)用(yòng)50mmol/L磷(lín)酸鹽(yán)緩衝液和(hé)30mmol/L三(sān)乙(yǐ)胺溶(róng)液。

注：流動相中(zhōng)加入有機(jī)胺可以(yǐ)減(jiǎn)弱(ruò)鹼(jiǎn)性溶質(zhì)與(yǔ)殘餘矽(guī)醇(chún)基的(dí)相互作用，減(jiǎn)輕(qīng)或消除(chú)峰拖(tuō)尾(wěi)現象(xiàng)。所以在(zài)這種(zhǒng)情況(kuàng)下有機胺(àn)（如三(sān)乙胺）又(yòu)稱為減尾劑(jì)或除尾(wěi)劑。